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克隆胚產制過程

2010-08-03 17:09 醫(yī)學教育網(wǎng)
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  動物克隆胚產制過程,主要包括受核卵母細胞的去核操作、細胞注入卵的顯微操作、受核卵母細胞與注入細胞的細胞融合以及融合細胞的激活處理等四項技術。

  克隆動物所使用的細胞核來源,主要有已分化的細胞和未分化的胚葉細胞或胚干細胞。已分化細胞經(jīng)增生后仍維持其原有的細胞特性,如皮膚細胞只能增生為皮膚細胞,肝臟細胞也僅能增生成肝臟細胞;換言之,已分化細胞的后續(xù)發(fā)育命運,無法回溯到如早期胚般具有發(fā)育成完整個體的全能性。未分化的胚葉細胞或胚干細胞,雖具有發(fā)育成個體中各類細胞的能力,惟截至目前為止,僅見四細胞期以前的早期胚的單一胚葉細胞,有發(fā)育成完整個體的紀錄,而八細胞期以上的仍無成功的案例;顯見此等單一未分化細胞,發(fā)育成個體的潛能仍局限于甚早的胚期,但若將這些未分化或已分化的單一細胞,注入卵母細胞,則可改變其命運使之有能力發(fā)育成一完整生命體。

  哺乳動物的克隆并非僅靠一個細胞即可達成,醫(yī)學教.育網(wǎng)搜集整理此一細胞必須借助卵母細胞內所含發(fā)軔因子,將基因組再程序化作用后,始具有發(fā)育能力。然因卵母細胞內原已擁有雙套的染色體,若不加以去除,它與注入含兩套染色體的體細胞融合后,將形成四套染色體的異?,F(xiàn)象。因此,首要步驟是先將卵母細胞內的雙套染色體去除,其后,再利用顯微操作技術,將含有正常兩套染色體的單一細胞注入卵內。

  當精子穿入卵透明帶與卵細胞膜接觸后,即產生自發(fā)性的融合現(xiàn)象,以促使精子細胞核進入卵內,而完成受精作用,這是自然的精卵受精過程。然而,克隆胚產制過程中,供核細胞在注入卵膜間隙后,供-受核細胞間無法自發(fā)性發(fā)生如精卵接觸后的融合現(xiàn)象,而必須藉由外力迫使其融合。利用電刺激可促使細胞融合,乃因細胞經(jīng)電激處理后,細胞膜表面會形成約0.5奈米的小孔,經(jīng)證實,此小孔即為導引兩細胞發(fā)生融合的媒介。

  大多數(shù)哺乳動物的卵母細胞在排卵時,其細胞周期乃靜休于第二次減數(shù)分裂中期。正常授精情況下,精子表面與卵母細胞貼附時,在接觸位置引發(fā)卵母細胞內鈣離子濃度的增加,并在3~6秒的時間內,迅速擴及整個細胞,引導卵母細胞產生皮質顆粒胞泌作用,防止多精入卵。隨后,細胞內鈣離子濃度呈現(xiàn)周期性增加,并持續(xù)數(shù)小時,進而激活卵母細胞,使其恢復第二次減數(shù)分裂。

  體細胞克隆時,雖供核細胞已融入卵母細胞內,但供核細胞融入后,并無法激發(fā)如精卵融合后所產生的激活機制,因而需要以人為激活方式,模仿精子激活卵母細胞。利用電刺激或酒精,增加卵母細胞內鈣離子的濃度,或直接以化學試劑抑制細胞靜止因子的活性,均可激活卵母細胞。

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