方法名稱：

維生素D2的測定—高效液相色譜法

應用范圍：

本方法采用高效液相色譜法測定維生素D2的含量。

本方法適用維生素D2。

方法原理：

供試品和內標均制成甲醇溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處檢測維生素D2（C28H44O）和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計算出其含量。

試劑：

1.異辛烷

2. 正己烷

3. 正戊醇

儀器設備：

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

硅膠為填充劑，維生素D2峰與內標物質峰的分離度應符合要求。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動相：正己烷＋正戊醇= 997 3

2.2 檢測波長：254nm

2.3 柱溫：室溫

試樣制備：

1. 稱取供試品

取本品25mg，精密稱定，置100mL棕色量瓶中。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取維生素D2對照品和維生素D3對照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加異辛烷80mL，避免加熱，超聲處理1分鐘使完全溶解，并加異辛烷至刻度，搖勻，沖氮密塞，避光，0℃以下保存。

3. 內標溶液的制備

取鄰苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度，即得。

4. 供試品溶液的制備

上述供試品加三甲基戊烷80mL，避免加熱，用超聲處理1分鐘使溶解，加三甲基戊烷稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液與內標溶液各5mL，置50mL棕色量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長254nm處測定維生素D2和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，按內標法以峰面積計算，即得。

參考文獻：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005年版，二部，p672。