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IPTG誘導原理

2012-06-11 13:44 醫(yī)學教育網(wǎng)
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首先

E.coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個結(jié)構基因,分別編碼半乳糖苷酶、透酶和乙?;D(zhuǎn)移酶,此外還有一個操縱序列O、一個啟動序列P及一個調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子(元)受阻遏而處于關閉狀態(tài)。在啟動序列P上游還有一個分解(代謝)物基因激 活蛋白(CAP)結(jié)合位點。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點共同構成lac操縱子的調(diào)控區(qū),三個酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié),實現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表 達 。

其次

在沒有乳糖存在時,lac操縱子(元)處于阻遏狀態(tài)。此時,I序列在PI啟動序列操縱下表達的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合,阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié) 合,抑制轉(zhuǎn)錄起動。當有乳糖存在時,lac操縱子(元)即可被誘導。在這個操縱子(元)體系中,真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞,經(jīng)β-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)榘肴樘?。后者作為一種誘導劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構象變化,導致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用與半乳糖相同,是一 種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實驗室廣泛應用。

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