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蛋白酶活力測定

2012-04-05 17:42 來源:
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照品溶液的制備 精密稱取經 105℃干燥至恒重的酪氨酸 適量,加鹽酸溶液〔取1mol/L鹽酸溶液65ml,加水至1,000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。

供試品溶液的制備 取本品適量,精密稱定,用上述鹽酸溶液制成每1ml 中約含 0.2 ~0.4 的溶液。

測定法 取試管6 支,其中3 支各精密加入對照品溶液1ml ,另3 支各精密加入供 試品溶液1ml ,置37±0.5 ℃水浴中,保溫5 分鐘,精密加入預熱至37±0.5 ℃的血紅 蛋白試液5ml ,搖勻,并準確計時,在37±0.5 ℃水浴中反應10分鐘。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ,搖勻,濾過,棄去初濾液,取續(xù)濾液備用。另取試管2 支,各精密 加入血紅蛋白試液5ml ,置37±0.5 ℃水浴中保濕10分鐘,再精密加入 5%三氯醋酸溶 液5ml ,其中1 支加供試品溶液1ml ,另1 支加上述鹽酸溶液1ml ,搖勻,濾過,棄去 初濾液,取續(xù)濾液,分別作為供試品和對照品的空白對照,照分光光度法(附錄Ⅳ A) 在275nm 的波長處測定吸收度,算出平均值AS 和A,按下式計算。

每g含蛋白酶活力單位數=(A×Ws×n)/(As×W×10×181.19)

式中

AS 為對照品的平均吸收度;A為供試品的平均吸收度;Ws =1ml 對照品溶液中含酪氨酸的量,μg ;W=供試品取樣量,g ;n=供試品的稀釋倍數。

在上述條件下,每分鐘能催化水解血紅蛋白生成1 μmol 酪氨酸的酶量,為一個蛋 白酶活力單位。

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