用品及準備

　　5％A、B、O和Le（a+b-）紅細胞懸液，與待檢者相同，標化的抗A、抗B、抗H、抗Lea血清，已知的分泌型和非分泌型唾液，其A、B、O型與待檢者相同。燒杯或粗口試管、煮鍋等，其他材料同ABO血型鑒定。

　　方法及內容

　　1.唾液的留取①將自然流出的唾液5—10ml盛入干燥清潔的容器（小燒杯、三角瓶或粗口試管等）內，在水浴中煮沸10min（以滅活能使血型物質不活化的唾液酶，同時也破壞常見存在于唾液中的抗A及抗B）。②以3000r/min離心10min，留取上清液備用，棄去不透明的半固態(tài)物質。

　　2.試劑血清修正液的制備  ①取小試管分成4排，每排5支，分別標明第1排A1～A5，第2排B1～B5，第3排H1～H5，第4排Lea1～Lea5.②各排從第2管開始，每管加生理鹽水0.1ml.③第1—4排的第1和第2管分別加抗A、抗B、抗H及抗Lea血清0.1ml，從第2管開始倍量稀釋。④于第1排各管加2％-5％的A型紅細胞鹽水懸液0.1ml；第2排各管加2％-5％的B型紅細胞鹽水懸液0.1ml；第3排各管加2％-5％的O型紅細胞鹽水懸液0.1ml；第4排各管加2％-5％的Le（a+b-）型紅細胞鹽水懸液0.1ml.⑤振搖試管架使之混勻，置室溫lh后觀察結果。每排以出現(xiàn)“4+”凝集的最高稀釋度為最適稀釋度。

　　3.唾液中血型物質的檢測

　?。?）準備唾液做陽性或陰性對照。對ABH分泌者，使用已知Se（分泌型）和sese（非分泌型）人的唾液。對Lewis分泌者，使用Lea陽性和Lea陰性人的唾液?？梢杂脤t細胞試驗的結果來選擇這些對照。陽性對照應該有Le（a+b-）的紅細胞，陰性對照應該有Le（a-b-）的紅細胞。試劑對照用生理鹽水。（2）取4支試管，對ABH試驗分別標明待檢者、分泌型、非分泌型和生理鹽水。對Lewis試驗分別標明待檢者、Lewis陽性、Lewis陰性和生理鹽水。（3）按標記分別加入最適稀釋度抗血清1滴。（4）在相應的試管中加入唾液1滴，在對照管中加入生理鹽水1滴。（5）混合后在室溫孵育30min，中和抗體。（6）每管中加入5％已洗滌并與抗體相對應的紅細胞懸液1滴。（7）混合后置室溫孵育1h或15min后，以3000r/min離心15s，觀察結果。

　　結果判讀：先看對照，分泌型對照應不凝集，非分泌型應凝集。待檢者若不凝集為分泌型，凝集為非分泌型。Lewis試驗，先看對照，陽性對照應不凝集，陰性對照凝集。待檢者不凝集為陽性，凝集者為Lea陰性。

　　4.血型物質效價測定

　?。?）取小試管10支，依次編號。第2～10管各加入生理鹽水0.1ml.（2）第1、2管各加入待檢者唾液0.1ml，從第2管開始倍比稀釋，第10管為對照管。（3）每管加相應的經修正過的試劑血清（待檢者為A型，則用抗A；B型用抗B；O型用抗H；AB型用抗A和抗B；Lea+用抗Lea0.1ml，混勻后，置室溫（20℃）30min.（4）每管再加入與待檢者同型的5％紅細胞懸液一滴，混合后放置室溫（20℃）1h，觀察結果。（5）結果判讀：先看對照的第10管，然后依次看1—9管，以抑制紅細胞凝集的最后一管的稀釋倍數(shù)為該唾液中血型物質的效價。（6）注意事項：①漱口后留取唾液，以免食物殘渣混入；②為增加唾液分泌，待檢者可嚼蠟、石蠟膜或橡皮條，但不能嚼口香糖或其他含糖或蛋白質的食品；③如果當日試驗用，血型物質可置4℃冰箱保存；如果暫時不用，可置低溫冰箱冰凍保存，可保留其活性幾年；④每次試驗最好備有分泌型和非分泌型唾液作對照。