二、熒光分析法

　　(一)特點：靈敏度高,干擾因素多，必須作空白

　　(二)基本原理

　　熒光的產生：化學物質能從外界吸收并儲存能量(如光能、化學能等)而進入激發(fā)態(tài)，當其從激發(fā)態(tài)再回復到基態(tài)時，過剩的能量可以電磁輻射的形式放射(即發(fā)光)。熒光發(fā)射的特點是：可產生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光;而一旦停止供能，發(fā)光(熒光)現(xiàn)象也隨之在瞬間內消失。

　　發(fā)射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強度，除受激發(fā)光強度影響外，也與激發(fā)光的波長有關。各個熒光分子有其特定的吸收光譜和發(fā)射光譜(熒光光譜)，即在某一特定波長處有最大吸收峰和最大發(fā)射峰。選擇激發(fā)光波長量接近于熒光分子的最大吸收峰波長，且測定光波量接近于最大發(fā)射光波峰時，得到的熒光強度也最大。

　　物質的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可以用作該物質的定性分析。當激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質在一定濃度范圍內，其發(fā)射光強度與溶液中該物質的濃度成正比關系，可以用作定量分析。

　　Ci=[(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)]×Cr

　　熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，故熒光分析法應在低濃度溶液中進行。

　　(二)熒光分光光度計

　　激發(fā)光源→激發(fā)光單色器→樣品池

　　↓

　　發(fā)射光單色器→檢測器→數(shù)據(jù)記錄處理

　　樣品池用低熒光材料制成，四面透光，發(fā)射光方向與激發(fā)光成直角。

　　(三)應用

　　熒光分析可用于鑒別和含量測定。一般采用對照品比較法測定含量，靈敏度高、選擇性好，但干擾多、線性范圍窄，多用于需要高靈敏度和允許較大變異性的樣品分析。