顯微鏡下如何準(zhǔn)確計(jì)數(shù)紅細(xì)胞?
在顯微鏡下準(zhǔn)確計(jì)數(shù)紅細(xì)胞,通常采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(如Neubauer改良型計(jì)數(shù)板)進(jìn)行。具體步驟如下:
1. 準(zhǔn)備樣品:首先將血液稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛?,一般情況下是用等滲的鹽水或者專(zhuān)門(mén)的稀釋液按一定比例稀釋?zhuān)热?:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計(jì)數(shù)板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專(zhuān)用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計(jì)數(shù)板上,避免產(chǎn)生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計(jì)數(shù)板上的特定區(qū)域進(jìn)行觀察。Neubauer改良型計(jì)數(shù)板上有五個(gè)大方格區(qū),每個(gè)大格又分為16個(gè)小方格。一般選取四個(gè)角的大方格和中間的一個(gè)大格共5個(gè)區(qū)域來(lái)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞。
5. 計(jì)數(shù):在選定的區(qū)域內(nèi)逐個(gè)計(jì)數(shù)所有可見(jiàn)的紅細(xì)胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計(jì)算位于邊界線左側(cè)或上方的細(xì)胞;若細(xì)胞正好落在兩條線相交處,則僅計(jì)算左上線和右下線上的細(xì)胞。
6. 計(jì)算濃度:根據(jù)所使用的稀釋比例及計(jì)數(shù)板的具體規(guī)格,將實(shí)際觀察到的數(shù)量轉(zhuǎn)換成每微升血液中的紅細(xì)胞數(shù)目。例如,如果Neubauer改良型計(jì)數(shù)板上5個(gè)區(qū)域共觀察到了N個(gè)紅細(xì)胞,并且是按照1:200的比例稀釋?zhuān)瑒t原血樣中每微升的紅細(xì)胞數(shù)量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數(shù)據(jù)記錄與分析:將計(jì)算結(jié)果記錄下來(lái),必要時(shí)進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)以提高準(zhǔn)確性,并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
需要注意的是,在整個(gè)過(guò)程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護(hù)也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。
1. 準(zhǔn)備樣品:首先將血液稀釋到適當(dāng)?shù)臐舛?,一般情況下是用等滲的鹽水或者專(zhuān)門(mén)的稀釋液按一定比例稀釋?zhuān)热?:200的比例。
2. 加樣:使用微量移液器吸取少量稀釋后的血樣(通常為10微升),然后輕輕滴加至計(jì)數(shù)板的凹槽中。確保液體完全覆蓋計(jì)數(shù)區(qū)域但不要溢出。
3. 覆蓋蓋玻片:將專(zhuān)用的蓋玻片平穩(wěn)地放在計(jì)數(shù)板上,避免產(chǎn)生氣泡。
4. 顯微鏡觀察:選擇合適的放大倍率(通常為10x或20x),找到計(jì)數(shù)板上的特定區(qū)域進(jìn)行觀察。Neubauer改良型計(jì)數(shù)板上有五個(gè)大方格區(qū),每個(gè)大格又分為16個(gè)小方格。一般選取四個(gè)角的大方格和中間的一個(gè)大格共5個(gè)區(qū)域來(lái)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞。
5. 計(jì)數(shù):在選定的區(qū)域內(nèi)逐個(gè)計(jì)數(shù)所有可見(jiàn)的紅細(xì)胞。遵循“左不右、上不算下”的原則,即只計(jì)算位于邊界線左側(cè)或上方的細(xì)胞;若細(xì)胞正好落在兩條線相交處,則僅計(jì)算左上線和右下線上的細(xì)胞。
6. 計(jì)算濃度:根據(jù)所使用的稀釋比例及計(jì)數(shù)板的具體規(guī)格,將實(shí)際觀察到的數(shù)量轉(zhuǎn)換成每微升血液中的紅細(xì)胞數(shù)目。例如,如果Neubauer改良型計(jì)數(shù)板上5個(gè)區(qū)域共觀察到了N個(gè)紅細(xì)胞,并且是按照1:200的比例稀釋?zhuān)瑒t原血樣中每微升的紅細(xì)胞數(shù)量為:(N/5) 200 10^4。
7. 數(shù)據(jù)記錄與分析:將計(jì)算結(jié)果記錄下來(lái),必要時(shí)進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)以提高準(zhǔn)確性,并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
需要注意的是,在整個(gè)過(guò)程中要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,避免污染樣本。此外,顯微鏡的清潔維護(hù)也很重要,保證視野清晰干凈有助于獲得更準(zhǔn)確的結(jié)果。

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