制備單克隆抗體時(shí),融合細(xì)胞的選擇依據(jù)是什么?
在制備單克隆抗體制備過(guò)程中,選擇融合細(xì)胞主要是基于以下幾個(gè)方面:
1. 融合效率高:理想的融合伴侶應(yīng)該能夠與脾細(xì)胞高效地發(fā)生融合。骨髓瘤細(xì)胞系是最常用的融合細(xì)胞,因?yàn)樗鼈兙哂休^高的融合率。
2. 無(wú)內(nèi)源性抗體產(chǎn)生能力:為了確保所獲得的單克隆抗體是由雜交瘤分泌而非來(lái)自融合細(xì)胞本身,選擇那些不能合成免疫球蛋白的骨髓瘤細(xì)胞作為融合對(duì)象是非常重要的。這可以通過(guò)檢測(cè)其DNA中是否存在重排的免疫球蛋白基因來(lái)確定。
3. 具備體外長(zhǎng)期增殖能力:所選骨髓瘤細(xì)胞必須能夠在體外持續(xù)生長(zhǎng)并保持穩(wěn)定狀態(tài),以利于后續(xù)篩選和擴(kuò)大培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的工作。
4. 對(duì)特定選擇性培養(yǎng)基敏感:為了從混合物中有效分離出雜交瘤細(xì)胞,需要使用能夠抑制未融合的脾細(xì)胞以及非生產(chǎn)型雙倍體骨髓瘤細(xì)胞生存的選擇性培養(yǎng)基。因此,所選骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)對(duì)該類(lèi)培養(yǎng)基具有高度敏感性。
5. 便于遺傳操作和表型篩選:在某些情況下,可能還需要對(duì)骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行基因工程改造以增強(qiáng)其特定功能或特性,如提高抗體產(chǎn)量、改變抗體類(lèi)型等。此時(shí),則需選擇那些易于進(jìn)行遺傳修飾且容易通過(guò)表面標(biāo)志物或其他方法識(shí)別的細(xì)胞株。
綜上所述,在制備單克隆抗體制備過(guò)程中,融合細(xì)胞的選擇需綜合考慮以上多個(gè)因素,并根據(jù)實(shí)際需求具體確定最合適的骨髓瘤細(xì)胞系。
1. 融合效率高:理想的融合伴侶應(yīng)該能夠與脾細(xì)胞高效地發(fā)生融合。骨髓瘤細(xì)胞系是最常用的融合細(xì)胞,因?yàn)樗鼈兙哂休^高的融合率。
2. 無(wú)內(nèi)源性抗體產(chǎn)生能力:為了確保所獲得的單克隆抗體是由雜交瘤分泌而非來(lái)自融合細(xì)胞本身,選擇那些不能合成免疫球蛋白的骨髓瘤細(xì)胞作為融合對(duì)象是非常重要的。這可以通過(guò)檢測(cè)其DNA中是否存在重排的免疫球蛋白基因來(lái)確定。
3. 具備體外長(zhǎng)期增殖能力:所選骨髓瘤細(xì)胞必須能夠在體外持續(xù)生長(zhǎng)并保持穩(wěn)定狀態(tài),以利于后續(xù)篩選和擴(kuò)大培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的工作。
4. 對(duì)特定選擇性培養(yǎng)基敏感:為了從混合物中有效分離出雜交瘤細(xì)胞,需要使用能夠抑制未融合的脾細(xì)胞以及非生產(chǎn)型雙倍體骨髓瘤細(xì)胞生存的選擇性培養(yǎng)基。因此,所選骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)對(duì)該類(lèi)培養(yǎng)基具有高度敏感性。
5. 便于遺傳操作和表型篩選:在某些情況下,可能還需要對(duì)骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行基因工程改造以增強(qiáng)其特定功能或特性,如提高抗體產(chǎn)量、改變抗體類(lèi)型等。此時(shí),則需選擇那些易于進(jìn)行遺傳修飾且容易通過(guò)表面標(biāo)志物或其他方法識(shí)別的細(xì)胞株。
綜上所述,在制備單克隆抗體制備過(guò)程中,融合細(xì)胞的選擇需綜合考慮以上多個(gè)因素,并根據(jù)實(shí)際需求具體確定最合適的骨髓瘤細(xì)胞系。

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