革蘭氏染色是一種重要的細(xì)菌鑒別方法，其主要步驟包括：
1. 制片：首先將待檢細(xì)菌涂布在干凈的載玻片上，形成均勻的薄層。
2. 固定：通過(guò)火焰固定或化學(xué)固定法使菌體附著于載玻片上。通常將載玻片輕輕過(guò)火2-3次即可完成熱固定過(guò)程。
3. 初染：滴加結(jié)晶紫染液覆蓋整個(gè)涂片，染色1分鐘。
4. 水洗：用蒸餾水沖洗掉多余的染料，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
5. 碘液媒染：加入碘液處理1分鐘，使細(xì)菌內(nèi)的結(jié)晶紫與碘形成復(fù)合物。
6. 再次水洗：去除表面的碘液。
7. 脫色：使用95%乙醇或丙酮-乙醇混合液脫色30秒至1分鐘。此步驟是革蘭氏染色的關(guān)鍵，可以區(qū)分出革蘭陽(yáng)性菌和陰性菌。
8. 復(fù)染：用沙黃復(fù)染液或其他對(duì)比顏色的染料進(jìn)行復(fù)染約1分鐘。
9. 最后水洗：徹底清洗掉殘留的染液，并立即吸干水分。

經(jīng)過(guò)上述步驟處理后的涂片，在顯微鏡下觀察，革蘭陽(yáng)性菌呈現(xiàn)紫色，而革蘭陰性菌則為紅色。