單克隆抗體制備的核心步驟是什么？
單克隆抗體制備的核心步驟主要包括以下幾個(gè)方面：
首先是免疫動物，選擇合適的動物（如小鼠）注射特定的抗原物質(zhì)，以刺激其體內(nèi)產(chǎn)生針對該抗原的特異性抗體。
然后是細(xì)胞融合，從免疫后的動物脾臟中提取B淋巴細(xì)胞，并與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。通過使用聚乙二醇等促融劑來促進(jìn)兩種細(xì)胞之間的融合，形成雜交瘤細(xì)胞。
接著是篩選和克隆化，將上述獲得的雜交瘤細(xì)胞接種到選擇性培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基）中，只有成功融合且具有無限增殖能力的雜交瘤細(xì)胞能夠存活并生長。通過有限稀釋法或軟瓊脂平板法等技術(shù)對陽性克隆進(jìn)行篩選和純化。
最后是單抗生產(chǎn)與鑒定，將經(jīng)過多輪篩選得到的分泌目標(biāo)抗體的單一雜交瘤細(xì)胞系擴(kuò)大培養(yǎng)，并采用體內(nèi)（腹腔注射）或體外（懸浮培養(yǎng)）方式大量制備單克隆抗體。同時(shí)，還需對抗體的特異性、親和力等性質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)分析。
這些步驟共同構(gòu)成了單克隆抗體制備的基礎(chǔ)流程。
首先是免疫動物，選擇合適的動物（如小鼠）注射特定的抗原物質(zhì)，以刺激其體內(nèi)產(chǎn)生針對該抗原的特異性抗體。
然后是細(xì)胞融合，從免疫后的動物脾臟中提取B淋巴細(xì)胞，并與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合。通過使用聚乙二醇等促融劑來促進(jìn)兩種細(xì)胞之間的融合，形成雜交瘤細(xì)胞。
接著是篩選和克隆化，將上述獲得的雜交瘤細(xì)胞接種到選擇性培養(yǎng)基（如HAT培養(yǎng)基）中，只有成功融合且具有無限增殖能力的雜交瘤細(xì)胞能夠存活并生長。通過有限稀釋法或軟瓊脂平板法等技術(shù)對陽性克隆進(jìn)行篩選和純化。
最后是單抗生產(chǎn)與鑒定，將經(jīng)過多輪篩選得到的分泌目標(biāo)抗體的單一雜交瘤細(xì)胞系擴(kuò)大培養(yǎng)，并采用體內(nèi)（腹腔注射）或體外（懸浮培養(yǎng)）方式大量制備單克隆抗體。同時(shí)，還需對抗體的特異性、親和力等性質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)分析。
這些步驟共同構(gòu)成了單克隆抗體制備的基礎(chǔ)流程。
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