常用的抗血清純化方法有哪些?
在臨床上,抗血清的純化是制備高特異性、高效價(jià)抗體的重要步驟。常用的抗血清純化方法包括:
1. 鹽析法:利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離,最常用的是硫酸銨沉淀法。
2. 凝膠過(guò)濾層析:根據(jù)分子量大小的不同將目標(biāo)蛋白與其它小分子物質(zhì)分開(kāi)。當(dāng)混合物通過(guò)凝膠柱時(shí),大分子無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部而較快流出;相反地,小分子可以擴(kuò)散至凝膠孔隙中,移動(dòng)速度較慢,從而實(shí)現(xiàn)分離。
3. 離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的不同進(jìn)行分離。選擇合適的離子交換劑,在特定pH條件下使目標(biāo)蛋白與其他雜質(zhì)分開(kāi)。
4. 親和層析:利用抗原-抗體之間的特異性結(jié)合原理,將某種配體(如抗原、抗體等)固定在固相支持物上形成親和介質(zhì),當(dāng)含有目的蛋白質(zhì)的樣品流經(jīng)此介質(zhì)時(shí),目的蛋白質(zhì)會(huì)被特異地吸附下來(lái),其他非目標(biāo)成分則被洗脫掉。
5. 超濾法:通過(guò)半透膜技術(shù)去除小分子雜質(zhì),并濃縮目標(biāo)蛋白。適用于大體積樣本處理以及初步純化過(guò)程。
這些方法可以單獨(dú)使用也可以組合起來(lái)提高抗血清的純度和回收率。具體選擇哪種方法取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、設(shè)備條件及成本考慮等因素。
1. 鹽析法:利用不同蛋白質(zhì)在一定濃度的中性鹽溶液中的溶解度差異來(lái)實(shí)現(xiàn)分離,最常用的是硫酸銨沉淀法。
2. 凝膠過(guò)濾層析:根據(jù)分子量大小的不同將目標(biāo)蛋白與其它小分子物質(zhì)分開(kāi)。當(dāng)混合物通過(guò)凝膠柱時(shí),大分子無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部而較快流出;相反地,小分子可以擴(kuò)散至凝膠孔隙中,移動(dòng)速度較慢,從而實(shí)現(xiàn)分離。
3. 離子交換層析:基于蛋白質(zhì)表面電荷的不同進(jìn)行分離。選擇合適的離子交換劑,在特定pH條件下使目標(biāo)蛋白與其他雜質(zhì)分開(kāi)。
4. 親和層析:利用抗原-抗體之間的特異性結(jié)合原理,將某種配體(如抗原、抗體等)固定在固相支持物上形成親和介質(zhì),當(dāng)含有目的蛋白質(zhì)的樣品流經(jīng)此介質(zhì)時(shí),目的蛋白質(zhì)會(huì)被特異地吸附下來(lái),其他非目標(biāo)成分則被洗脫掉。
5. 超濾法:通過(guò)半透膜技術(shù)去除小分子雜質(zhì),并濃縮目標(biāo)蛋白。適用于大體積樣本處理以及初步純化過(guò)程。
這些方法可以單獨(dú)使用也可以組合起來(lái)提高抗血清的純度和回收率。具體選擇哪種方法取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、設(shè)備條件及成本考慮等因素。

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