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結核的實驗室簡述

2008-06-06 11:12 來源:
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  病原學檢查

  1.痰涂片顯微鏡檢查

  痰標本涂片萋一尼染色找抗酸桿菌具有快速、簡便等優(yōu)點。厚涂片可提高檢測陽性率。熒光染色檢查不需油鏡,視野范圍廣,敏感性高于抗酸染色,但易有假陽性。

  抗酸染色直接鏡檢不能區(qū)分結核和非結核分枝桿菌(nontubercu1ous mycobacteria),但在我國非結核分枝桿菌病相對較少,涂片找到抗酸桿菌絕大多數(shù)為結核桿菌,可以提示診斷。規(guī)定觀察300個視野,油鏡下所見判斷檢驗結果標準:0條/300視野(陰性);1-2條/300視野(可疑陽性);3~9條/100視野(+);1~9條/10視野(++);1~9條/視野(+++);≥10條/視野(++++)。除了痰標本外,膿液、病灶組織、纖支鏡刷檢物、沖洗或灌洗液均可用于直接涂片檢查。

  2.結核菌培養(yǎng)

  結核菌培養(yǎng)法具有很高敏感性和特異性。培養(yǎng)后可進行藥敏測試。隨著耐多藥結核菌增多,藥敏愈顯重要。近來應用BacteeTB460系統(tǒng),在含放射性14 C棕櫚酸底物的Th.分枝桿菌培養(yǎng)基,由于分枝桿菌產生帶有放射性14C,進行測定和推算。新的Bactee MGIT960系統(tǒng)以熒光素取代14C,可以避免核素污染。Bactec TB系統(tǒng)培養(yǎng)結核菌陽性報告時間較普通培養(yǎng)縮短10天左右,藥敏通常在培養(yǎng)陽性后的4~6天即可完成,且能快速將結核菌和非結核分枝桿菌加以鑒別。

  3.分子生物學檢測

  聚合酶鏈反應(PCR)技術可以將標本中微量的結核菌DNA加以擴增。一般鏡檢僅能檢測104~105條菌/毫升,而PCR可檢出1-100fg結核菌DNA(相當于1~20條菌/毫升)。但DNA提取過程遭遇污染等技術原因可以出現(xiàn)假陽性,而且PCR無法區(qū)別活菌和死菌,故不能用于結核病治療效果評估、流行病學調查等。目前PCR檢測僅推薦在非結核分枝桿菌病高發(fā)地區(qū)涂片抗酸桿菌陽性病例用來快速區(qū)分結核與非結核分枝桿菌。已有商用結核菌eDNA探針,由于實驗操作復雜等原因尚未在臨床上應用。核酸指印技術(eDNA finger printing)采用限制性內切酶片段多態(tài)性分析(restriction fragment 1ength po1ymorphism,RP1P),可用于鑒定所分離到的結核菌是否同源,用于流行病研究。

  4.結核菌

  抗原和抗體檢測采用E1ISA方法檢測痰標本中結核菌抗原的結果差異甚大,可能與痰標本中結核菌抗原分布不甚均勻有關。采用不同的抗原檢測肺結核患者血標本中結核菌IgG的敏感性為24%-100%不等,特異性為71%-100%。我國采用PPD作為抗原檢測結核菌IgG,敏感性和特異性分別為60%-80%和90%,抗體檢測主要是用于臨床和X線影像學疑為肺結核而不易獲得痰標本的兒童及痰涂陰性肺結核患者的診斷參考。

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